摘要:本文利用離子色譜法成功的測定了尿液中的草酸根、鈣、鎂離子。測草酸時先在尿液中加入氯化
鈣而生成草酸鈣沉淀,再用鹽酸溶解該沉淀的尿樣預處理方法;測鈣鎂時利用消解預處理方法, 即在
酸性尿樣中加入氧化劑過硫酸鉀, 然后在微沸狀態下氧化尿中的有機物, 從而除掉對柱有污染的物質。
關鍵詞:離子色譜法 尿 草酸根 鈣離子 鎂離子 測定
尿路結石的成分較為復雜,多為草酸鈣、磷酸鈣、磷酸鎂銨等,如這些晶體在尿液中飽和度過高,則易引
起析出、沉淀、結聚,以致尿石形成。尿路結石中zui常見的成分為草酸鈣,另外在堿性尿液中(pH值大于
7),磷酸鈣或磷酸鎂結石極易形成。可見尿路結石的形成與尿中的草酸、鈣離子、鎂離子含量有關。
目前,測定尿液中草酸、鈣離子、鎂離子主要用滴定法[1-4], 該方法操作復雜,受干擾因素較多,容
易導致測定結果不準確。而離子色譜法操作簡單、快速、方便[5],測定結果準確可靠,筆者用離子色譜
法測定了尿液中草酸、鈣離子、鎂離子,這對診斷及治療結石病有很重要的意義。
1 實驗部分
1.1 主要儀器與試劑
離子色譜儀:CIC-100型,青島盛瀚色譜技術有限公司;
陰分離柱:YSA8型,北京核工業研究院;
陽分離柱:KADY50P19型,德國艾米諾西斯公司;
Mg2+標準儲備液:1 mg/ml-1,國家標準物質研究中心;Ca2+標準儲備液:1 mg/ml-1,準確稱取0.2775gCaCl2,
用水溶解并定容到100mL;C2O42-標準儲備液:1 mg.ml-1,準確稱取0.2775gH2C2O4,用水溶解并定容到100mL;
C2O42-淋洗儲備液:Na2CO3:0.24mol.L-1,準確稱取25.4g Na2CO3,用水溶解并定容到1000mL;
NaHCO3:0.30mol.L-1,準確稱取25.5g NaHCO3,用水溶解并定容到1000mL;
Mg2+、 Ca2+淋洗儲備液:0.25mol乙二胺/0.15mol硝酸,在燒杯中加入100 mL去離子水,再依次加入
99%乙二胺8.5 mL、69%硝酸3.1 mL和99%冰醋酸20 mL,然后滴加冰醋酸調節pH值為4.5,定容到500mL;
樣品溶液均用孔徑為0.22um濾膜濾過;
實驗所用藥品均為分析純;
實驗用水為去離子水。
1.2 色譜條件
(1)測C2O42-
淋洗液為5.7 Na2CO3-4.8 NaHCO3mmol.L-1的混合液;淋洗液流速:1.4ml.min-1;進樣量100uL;
抑制電流50mA。
(2)測Mg2+、 Ca2+
淋洗液為1.25 mmol.L-1乙二胺/0.75 mmol.L-1硝酸;淋洗液流速:1.4ml.min-1;進樣量100uL;
單柱法。
1.3 樣品處理
(1)測C2O42-
取尿液80mL,微熱,加入0.3gCaCl2,緩慢攪拌約3分鐘,此時生成草酸鈣沉淀,保持恒溫靜置沉淀2小時
左右,過濾,沉淀用CaCl2稀溶液沖洗2次,然后用1mol/L的HCl溶液溶解沉淀, 沉淀*溶解后再用去離
子水沖洗濾紙兩次,收集溶解沉淀及沖洗濾紙的溶液,調其pH為7,然后用C18柱過濾,定容到100mL,待測。
(2)測Mg2+、 Ca2+
取30mL尿液,加入3g過硫酸鉀,再加入幾滴硫酸(使尿液顯酸性即可),加熱使尿液微沸,蒸至剩有少
量溶液但還沒有蒸干時停止加熱,冷卻后定容到50 mL,然后再稀釋5倍,用C18柱過濾,待測。
2 結果與討論
2.1 尿樣的預處理
尿液中的成份復雜,其中含有蛋白質等有機物以及陰陽離子等。蛋白質等有機物會污染分離柱中的離子
交換樹脂,導致柱效降低或者直接損壞分離柱,因此測定尿液時必須對其進行預處理以除去可污染分離
柱的成份。實驗表明,CaCl2 可與尿液中的C2O42-形成沉淀,過濾分離后用鹽酸溶解,C2O42-的回收率符
合要求。而像尿液中加入過硫酸鉀,在酸性條件下可將尿液中的有機物氧化去除,有效地消除測定Mg2+、
Ca2+時尿液中有機成分的干擾。
2.2 標準工作曲線
配制一系列C2O42- 、Mg2+、 Ca2+離子的標準溶液,它們的濃度分別為0.6、3、15、30、60;2、5、10、
20、30;5、10、20、30、40mg/L。分別在上述各離子色譜工作條件下,測定C2O42-、Mg2+、 Ca2+
離子的標準溶液,得到的C2O42- 、Mg2+、 Ca2+標準曲線分別為:
Y = 15317.27 + 3.128x104X,r = 0.9998;Y = 39792.83 + 1.673x104 X,r = 0.9955;
Y = 1485. 90 + 1.556x105 X,r=0.9996。可見,在所測定范圍內,C2O42-、Mg2+、 Ca2+離子的濃度與
峰高成很好的線性關系。
2.3 精密度實驗
分別取15、10、20 mg/L的C2O42-、Mg2+、 Ca2+作為標樣,平行測定5次結果列于表2,結果表明C2O42-、
Mg2+、 Ca2+的相對標準偏差RSD分別小于2.4%、3.1%、2.5%,可見本分析系統有很好的重現性。
2.4 回收率實驗
為了考察本方法測定結果的可靠性,用實際樣品尿液做回收率實驗。其測定結果如表3所示。可見本方法測定結果準確可靠。
2.5尿液樣品的測定
尿樣中C2O42-、Mg2+、 Ca2+的測定譜圖如圖1、圖2所示。測定結果如表5所示。
3 結論
利用氯化鈣生成草酸鈣沉淀。再用鹽酸溶解該沉淀以測定C2O42-,用過硫酸鉀氧化除去尿液中的有機成
分,以消除測定Mg2+、 Ca2+時的干擾。離子色譜法測定C2O42-、 Mg2+、 Ca2+操作簡便,結果準確。
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